Introducción: La enfermedad de Chagas es una parasitosis producida por un protozoo flagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi). Es endémica en regiones tropicales de América del Sur y América Central, donde se considera uno de los principales problemas de salud pública. Por las características clínicas de signos inespecíficos en la fase inicial de la enfermedad, el período prolongado de incubación y las complicaciones fatales que ocurren en la fase crónica, se hace necesario disponer  de métodos serológicos de elevada sensibilidad y especificidad. Objetivos: En el presente trabajo nos propusimos evaluar la especificidad del diagnosticador UMELISA CHAGAS con muestras de suero de poblaciones cubanas y de áreas endémicas de la enfermedad. Materiales y métodos: Para esto se utilizaron 2163 muestras de suero de donantes de sangre procedentes del Banco Provincial de Sangre de La Habana y 575 muestras de suero negativas provenientes de 19 regiones endémicas de la enfermedad, las cuales fueron evaluadas en el UMELISA CHAGAS, ensayo inmunoenzimático indirecto utilizado para la detección de anticuerpos IgG específicos al T. cruzi y en  Bioelisa CHAGAS (Biokit SA. España) como ensayo de referencia. Resultados:Los porcentajes de especificidad obtenidos para las muestras cubanas, áreas endémicas en su conjunto  así como separadas por países fueron de forma general mayores del 96%, con excepción de Venezuela y Colombia que están por encima del 80%. Conclusiones: Estos resultados son similares a los reportados en estudios de especificidad realizados en otros ensayos para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas.